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審計(jì)追蹤液相色譜的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)介紹
點(diǎn)擊次數(shù)：3038 更新時(shí)間：2019-01-10
審計(jì)追蹤液相色譜的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)介紹
液質(zhì)聯(lián)用，即審計(jì)追蹤液相色譜 -質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，是目前很好的檢測(cè)技術(shù)，以其快速的分離能力、超高的靈敏度著稱.本文將介紹液質(zhì)聯(lián)用法的原理,優(yōu)點(diǎn),分離方法以及應(yīng)用，對(duì)于想要發(fā)高分文章，希望自己的數(shù)據(jù)被認(rèn)可的客戶，可以了解一下。
液質(zhì)聯(lián)用的原理：
液質(zhì)聯(lián)用是以審計(jì)追蹤液相色譜為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測(cè)系統(tǒng)。樣品經(jīng)過審計(jì)追蹤液相色譜分離后，流動(dòng)相分流進(jìn)入質(zhì)譜儀，在離子源被電離，產(chǎn)生帶有一定電荷、質(zhì)量數(shù)不同的離子。質(zhì)譜儀依據(jù)不同離子在電磁場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)行為不同來檢測(cè)各個(gè)離子，根據(jù)每一個(gè)離子的質(zhì)荷比（質(zhì)量與電荷數(shù)比值）不同，顯示在色譜圖上，后通過對(duì)色譜圖的分析，得到樣品的檢測(cè)數(shù)據(jù)。
液質(zhì)聯(lián)用法對(duì)于樣品的要求：
同任何其他分析方法一樣，樣品前處理在LC-MS分析中是重中之重的。對(duì)所用樣品，無論是什么類別，都有如下要求：
樣品清潔，盡量不含雜質(zhì)，由于蛋白質(zhì)和肽類在ESI上有很強(qiáng)的響應(yīng)，這兩樣化合物尤其要注意；
樣品不宜含有高濃度的難揮發(fā)酸（磷酸，硫酸等）及其鹽，這些會(huì)引起液質(zhì)聯(lián)用儀很強(qiáng)的噪聲；
為了防止堵塞柱子、噴口及毛細(xì)管入口，樣品的粘度不要太大。
液質(zhì)聯(lián)用法用于樣品分離的常用方法：
1.固相萃取（SPE）
這是應(yīng)用廣泛的處理樣品的方法，固定相是吸附劑，流動(dòng)相是萃取過程中的水樣。當(dāng)固定相與流動(dòng)相接觸時(shí)，其中的某些痕量物質(zhì)就保留在固定相中。這時(shí)用少量的選擇性溶劑洗脫，即可達(dá)到富集和純化目標(biāo)物的目的。
分離方法的比較
方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)
液液萃取法儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，應(yīng)用廣泛工作量大，溶劑消耗大，污染環(huán)境
蛋白沉淀操作簡(jiǎn)單，儀器設(shè)備簡(jiǎn)單檢測(cè)靈敏度低，非特異性沉淀
固相萃取回收率高，重現(xiàn)性好。需要建立方法，成本較高
2.阻定性進(jìn)入介質(zhì)：
阻定性進(jìn)入介質(zhì)（restricted access media，RAM)有兩層不同的表面，即外層表面與內(nèi)層表面，外層表面通過體積排除作用僅允許小分子進(jìn)入內(nèi)層表面。內(nèi)層表面通過傳統(tǒng)的分配作用“捕獲”被分析物。RAM介質(zhì)常用于在大分子共存時(shí)小分子樣品的分離和富集.可有效地除去血液和尿液中的基質(zhì)。
3.灌注固相萃?。?br /> 灌注填料是近些年才出現(xiàn)的一種填料，顆粒上同時(shí)有貫通型的孔以及擴(kuò)散型的穴。這種填料制成的固相萃取用品或液相柱，可以以每min幾十ml的速度上樣，用于諸如培養(yǎng)基中蛋白質(zhì)和肽類的分離、富集和脫鹽，具有不可比擬的優(yōu)勢(shì)。
4.超濾：
超濾（ultrafiltration)是一種加壓膜分離技術(shù)，小分子溶質(zhì)和溶劑在一定壓力下，穿過一定孔徑的特制的薄膜，過濾了大分子物質(zhì)，從而達(dá)到純化大分子物質(zhì)的目的。具有操作簡(jiǎn)便，成本低廉，條件溫和等眾多優(yōu)勢(shì)，但不能用于蛋白溶液。
5.免疫親和萃?。?br /> 免疫親和萃取是基于固相化的配基（抗體）和樣品之間的相互作用的樣品前處理方法，具有分離效率高、專屬性高等優(yōu)點(diǎn)。其原理是分析物（抗原）結(jié)合特異性抗體，可以通過不同于樣品溶液PH或離子強(qiáng)度的緩沖液洗脫而達(dá)到分離和純化的目的。 上一篇 淺析EPC氣相色譜法在煤化工領(lǐng)域的應(yīng)用 下一篇 苯系物檢測(cè)氣相色譜的基本原理和優(yōu)缺點(diǎn)
液質(zhì)聯(lián)用，即審計(jì)追蹤液相色譜 -質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，是目前很好的檢測(cè)技術(shù)，以其快速的分離能力、超高的靈敏度著稱.本文將介紹液質(zhì)聯(lián)用法的原理,優(yōu)點(diǎn),分離方法以及應(yīng)用，對(duì)于想要發(fā)高分文章，希望自己的數(shù)據(jù)被認(rèn)可的客戶，可以了解一下。
液質(zhì)聯(lián)用的原理：
液質(zhì)聯(lián)用是以審計(jì)追蹤液相色譜為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測(cè)系統(tǒng)。樣品經(jīng)過審計(jì)追蹤液相色譜分離后，流動(dòng)相分流進(jìn)入質(zhì)譜儀，在離子源被電離，產(chǎn)生帶有一定電荷、質(zhì)量數(shù)不同的離子。質(zhì)譜儀依據(jù)不同離子在電磁場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)行為不同來檢測(cè)各個(gè)離子，根據(jù)每一個(gè)離子的質(zhì)荷比（質(zhì)量與電荷數(shù)比值）不同，顯示在色譜圖上，后通過對(duì)色譜圖的分析，得到樣品的檢測(cè)數(shù)據(jù)。
液質(zhì)聯(lián)用法對(duì)于樣品的要求：
同任何其他分析方法一樣，樣品前處理在LC-MS分析中是重中之重的。對(duì)所用樣品，無論是什么類別，都有如下要求：
樣品清潔，盡量不含雜質(zhì)，由于蛋白質(zhì)和肽類在ESI上有很強(qiáng)的響應(yīng)，這兩樣化合物尤其要注意；
樣品不宜含有高濃度的難揮發(fā)酸（磷酸，硫酸等）及其鹽，這些會(huì)引起液質(zhì)聯(lián)用儀很強(qiáng)的噪聲；
為了防止堵塞柱子、噴口及毛細(xì)管入口，樣品的粘度不要太大。
液質(zhì)聯(lián)用法用于樣品分離的常用方法：
1.固相萃取（SPE）
這是應(yīng)用廣泛的處理樣品的方法，固定相是吸附劑，流動(dòng)相是萃取過程中的水樣。當(dāng)固定相與流動(dòng)相接觸時(shí)，其中的某些痕量物質(zhì)就保留在固定相中。這時(shí)用少量的選擇性溶劑洗脫，即可達(dá)到富集和純化目標(biāo)物的目的。
分離方法的比較
方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)
液液萃取法儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，應(yīng)用廣泛工作量大，溶劑消耗大，污染環(huán)境
蛋白沉淀操作簡(jiǎn)單，儀器設(shè)備簡(jiǎn)單檢測(cè)靈敏度低，非特異性沉淀
固相萃取回收率高，重現(xiàn)性好。需要建立方法，成本較高
2.阻定性進(jìn)入介質(zhì)：
阻定性進(jìn)入介質(zhì)（restricted access media，RAM)有兩層不同的表面，即外層表面與內(nèi)層表面，外層表面通過體積排除作用僅允許小分子進(jìn)入內(nèi)層表面。內(nèi)層表面通過傳統(tǒng)的分配作用“捕獲”被分析物。RAM介質(zhì)常用于在大分子共存時(shí)小分子樣品的分離和富集.可有效地除去血液和尿液中的基質(zhì)。
3.灌注固相萃?。?br /> 灌注填料是近些年才出現(xiàn)的一種填料，顆粒上同時(shí)有貫通型的孔以及擴(kuò)散型的穴。這種填料制成的固相萃取用品或液相柱，可以以每min幾十ml的速度上樣，用于諸如培養(yǎng)基中蛋白質(zhì)和肽類的分離、富集和脫鹽，具有不可比擬的優(yōu)勢(shì)。
4.超濾：
超濾（ultrafiltration)是一種加壓膜分離技術(shù)，小分子溶質(zhì)和溶劑在一定壓力下，穿過一定孔徑的特制的薄膜，過濾了大分子物質(zhì)，從而達(dá)到純化大分子物質(zhì)的目的。具有操作簡(jiǎn)便，成本低廉，條件溫和等眾多優(yōu)勢(shì)，但不能用于蛋白溶液。
5.免疫親和萃?。?br /> 免疫親和萃取是基于固相化的配基（抗體）和樣品之間的相互作用的樣品前處理方法，具有分離效率高、專屬性高等優(yōu)點(diǎn)。其原理是分析物（抗原）結(jié)合特異性抗體，可以通過不同于樣品溶液PH或離子強(qiáng)度的緩沖液洗脫而達(dá)到分離和純化的目的。 上一篇 淺析EPC氣相色譜法在煤化工領(lǐng)域的應(yīng)用 下一篇 苯系物檢測(cè)氣相色譜的基本原理和優(yōu)缺點(diǎn)
